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    肥料中海藻酸含量测定
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    关键词:海藻酸肥料
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    1 范围
    本标准规定了采用硫酸-咔唑分光光度法和间羟基联苯分光光度法测定肥料中海藻酸含量的试验方法。
    本标准适用于以海藻为原料加工制造的海藻酸肥料。
    硫酸咔唑显色法不适用于含硝酸根、葡萄糖等中性糖类物质及其它在比色过程中产生干扰的海藻酸肥料。
    间羟基联苯显色法不适用于含硝酸根、腐植酸类物质及其它在比色过程中产生干扰的海藻酸肥料。
    2 规范性引用文件
    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
    GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
    HG/T 2843化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液
    3 硫酸咔唑显色法
    3.1 方法原理
    海藻酸在强酸条件下水解为甘露糖醛酸和古罗糖醛酸, 这两种糖醛酸可在强酸中与咔唑缩合反应成为紫红色化合物,在550 nm处测定其吸光度,在一定浓度范围内,该化合物的吸光度与糖醛酸浓度成正比例关系,由此可以用分光光度法测定。
    3.2 试剂或材料
    本标准中所用试剂、水和溶液的配制,在未注明规格和配制方法时,应符合HG/T 2843的规定。
    3.2.1 浓硫酸:分析纯。
    3.2.2 无水乙醇:分析纯。
    3.2.3 咔唑-乙醇溶液:ρ(C12H9N)=2 g/L。称取0.20 g咔唑(准确至0.0002 g),溶于100 mL无水乙醇中。
    3.2.4 海藻酸钠标准品,纯度≥99.9%。
    3.2.5 海藻酸钠标准贮备溶液:ρ(海藻酸钠)=1.000 g/L。准确称取海藻酸钠标准样品0.1 g(准确至0.0002 g),置于100 mL烧杯中,用少量水溶解后,全部转移到100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。
    3.3 仪器设备
    3.3.1 分光光度计,带有光程为1 cm的吸收池,可在550 nm处测量。
    3.3.2 分析天平:感量精度为0.0001 g。
    3.3.3 恒温水浴。
    3.4 分析步骤
    3.4.1 试样的制备
    固体样品缩分至约100 g,将其迅速研磨至全部通过0.50 mm孔径试验筛(如样品潮湿,可通过1.00 mm试验筛),混合均匀,置于洁净、干燥容器中;液体样品经多次摇动后,迅速取出约100 mL,置于洁净、干燥容器中。
    3.4.2 试样溶液的制备
    称取约0.1~0.5 g(精确至0.0002 g)样品,置于100 mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,必要时干过滤,得试样溶液A。
    3.4.3 标准曲线的绘制
    取6个25 mL刻度试管,准确移取0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL海藻酸钠标准溶液(3.2.5),然后再分别准确加入3.0 mL、2.8 mL、2.6 mL、2.4 mL、2.2 mL、2.0 mL蒸馏水至3 mL混匀,配成一系列含海藻酸钠分别为0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、1.0 mg的标准工作溶液。放入冰水浴中,边振荡边缓慢加入浓硫酸(3.2.1)10 mL(开始要慢,约每秒1滴,待加入一半酸后可增加至每秒2滴),放入沸水浴中加热20分钟,取出刻度试管,待温度降至80ºC,加入咔唑-乙醇溶液0.3 mL,摇匀,室温下放置45 min,在波长550 nm处,用1 cm比色皿,以试剂空白为参比液,测其吸光值,拟定标准曲线方程。
    3.4.4 试样的测定
    准确移取适量试样溶液A(如海藻酸含量较高可适当稀释)置25 mL刻度试管中,加蒸馏水定容至3mL,后续步骤从“放入冰水浴中,………”与标准系列(3.4.3)同样处理。
    由于一般的海藻酸样品有颜色干扰,对于这种样品需进行空白试验,去除颜色干扰,方法为除显色阶段用0.3 mL无水乙醇代替咔唑乙醇溶液外,其余操作同试样溶液。
    3.4.5 空白试验
    除不加试样外,其他步骤同试样溶液。
    4 间羟基联苯显色法 
    4.1 方法原理
        海藻酸经含四硼酸钠-硫酸作用后,可与间羟基联苯反应形成紫红色化合物,在波长520 nm 处测定其吸光度。在一定浓度范围内,该化合物的吸光度与海藻酸含量呈线性关系,由此可以用分光光度法测定。
    4.2 试剂和溶液
    4.2.1 四硼酸钠-硫酸溶液:0.0125 mol/L四硼酸钠的浓硫酸溶液。准确称取十水合四硼酸钠0.478 g,置于100 mL烧杯中,用50 mL浓硫酸溶解后转移到100 mL容量瓶中,用浓硫酸洗涤烧杯内壁,并如容量瓶中重复洗涤2次,最后用浓硫酸定容至100 mL。
    4.2.2 氢氧化钠溶液:ρ(NaOH)=5 g/L。称取5 g氢氧化钠,用蒸馏水稀释至1 L。
    4.2.3 间羟基联苯:ρ(C12H10O)=1.5 g/L。称取间羟联苯0.15 g,溶于100 mL氢氧化钠溶液(4.2.2)中,置于棕色瓶中,阴暗处保存。
    4.2.4 海藻酸钠标准品:同3.2.4。
    4.2.5 海藻酸标准溶液:ρ(海藻酸钠)=0.100 mg/mL。准确吸取海藻酸标准贮备溶液(3.2.5)5.00 mL至50 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。使用前配置。
    4.3 仪器和设备
    4.3.1 分光光度计,带有光程为1 cm的吸收池,可在520 nm处测量。
    4.3.2 分析天平:感量精度为0.0001 g。
    4.3.3 恒温水浴。
    4.3.4 恒温振荡器。
    4.4 分析步骤
    4.4.1 试样的制备
    同3.4.1。
    4.4.2 试样溶液的制备
    同3.4.2。
    4.4.3 标准曲线的绘制
    取海藻酸钠标准溶液(4.2.5)0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL于试管中,用蒸馏水补加至 0.5 mL。冰浴预冷后加入3.0 mL四硼酸钠-硫酸试液,配成一系列含海藻酸钠分别为0 mg、0.01 mg、0.02 mg、0.03 mg、0.04 mg、0.05 mg的标准工作溶液。振摇混合,沸水浴5 min,以冰浴冷却至室温后,加入50 μL间羟基联苯(4.2.3),混匀,室温放置10 min后,在520 nm波长处,用1 cm比色皿,以试剂空白为参比液,测其吸光值,拟定标准曲线方程。
    4.4.4 试样溶液的测定
    准确移取适量试样溶液A(如海藻酸含量较高可适当稀释),与标准系列(4.4.3)同时同样处理。
    由于一般的海藻酸样品有颜色干扰,对于这种样品需进行试验空白,去除颜色干扰,方法为除显色阶段用50 μL氢氧化钠溶液代替间羟联苯溶液外,其余操作同试样溶液。
    4.4.5 空白试验
    除不加试样外,其他步骤同试样溶液。
    5 结果的表述:
    以质量分数表示的海藻酸含量               
              …………………………(1)
    式中:
    m1——从标准曲线查得试样溶液中海藻酸质量的准确数值,单位为毫克(mg);
    m0——空白中海藻酸质量的准确数值,单位为毫克(mg);
    m——试样质量,单位为克(g);
    V——移取试样溶液A的体积,单位为毫升(mL);
    1000——毫克转换为克的系数;
    0.8839——海藻酸钠换算为海藻酸的系数。
    6 允许差
    平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差应符合表1要求
    表1 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差
    海藻酸含量,% 平行结果测定的绝对差值,% 不同实验室测定结果的绝对差值,%
    ω≤2.0 ≤0.2 ≤0.4
    2.0<ω≤5.0 ≤0.5 ≤1.0
    5.0<ω≤10.0 ≤1.0 ≤2.0
    ω>10.0 ≤2.0 ≤4.0
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